Il s’agit de la Cathédrale la plus grande du sud des Pouilles et elle est située dans la partie la plus haute de la ville, en plein centre de l’ancien bourg.
Elle a été construite dans la seconde moitié de l’an 1000 sur les vestiges d’un domus romain, d’un village messapien et d’un temple paléochrétien. Elle est dédiée à Santa Maria Annunziata.
L’épisode le plus célèbre lié à la Cathédrale est certainement celui de l’invasion turque de 1480, pendant laquelle furent massacrés, à l’intérieur de l’église, tous les chrétiens qui s’y refugiaient. En outre, la Cathédrale fut transformée en Mosquée et ses trésors artistiques furent détruits. La population d’Otranto subit toutes ces brutalitées jusqu’à ce qu’elle soit libérée par les Aragonais.
L’intérieur de la Cathédrale est composé de trois nefs. En effet, dans la dernière nef se trouve la chapelle des martyres (en italien: Cappella dei Martiri), c’est-à dire des 800 chrétiens massacrés car ils refusèrent de renier leur foi, et il s’agit de la partie de l’église dédiée à la commémoration de l’extermination des ‘Martyres d’Otranto’.